O método Lowry et al., (1951) foi originalmente sugerido por Wu, (1922), sendo umas das técnicas mais empregadas para determinar a concentração de proteínas.
O princípio do método se fundamenta pela combinação de molibdato, tungstato e ácido fosfórico (reagente Folin-Ciocalteau), que pode reagir com proteínas, em meio ao catalisador cobre (II), gerando um composto de coloração azul com absorção máxima em 750 nm (Zaia; Zaia; Lichtig, 1998). A cisteína, tirosina e o triptofano são os aminoácidos cromógenos. A coloração do teste parece manter-se relativamente estável até 4 horas após a adição do reagente de Folin-Ciocalteau (POMORY, 2008). A reação pode ser mais bem observada na Figura 1.
Figura 1. Reação do reagente Folin em meio a catalisador cobre (ii).
O método de Lowry é bastante sensível, oferecendo maior precisão em comparação com outros métodos de determinação de proteínas, além de requerer menos amostras e ser menos propenso a certos tipos de interferências (Zaia; Zaia; Lichtig, 1998). Entretanto, tais vantagens não são suficientes para que este método seja 100% eficaz, uma vez que, o mesmo apresenta um tempo de análise extenso e também absortividade específica elevada, o que leva a alta variabilidade para diversas proteínas, e a lei de Lambert-Beer
funciona somente em um limitado intervalo de concentração de proteínas (Lowry et al., 1951).
Em seus estudos, Dawson e Heatlie (1984), confirmaram que outro fator que poderia interferir no método de Lowry seria a luz, pois os autores observaram que as absorbâncias estavam sempre mais altas em amostras expostas diretamente à luz natural, chegando à conclusão de que o teste pode ser sensível a luz.
Referências bibliográficas
LOWRY, O. H. et al. Protein measurement with the Folin phenol reagent. The Journal of biological chemistry, v. 193, n. 1, p. 265–275, nov. 1951.
WU, H. A New Colorimetric Method For The Determination Of Plasma Proteins. Journal of Biological Chemistry, v. 51, n. 1, p. 33–39, mar. 1922.
ZAIA, D. A. M.; ZAIA, C. T. B. V.; LICHTIG, J. Determinação de proteínas totais via espectrofometria: vantagens e desvantagens dos métodos existentes. Química Nova, v. 21, n. 6, p. 787–793, nov. 1998
POMORY, C. M. Color development time of the Lowry protein assay. Analytical Biochemistry, v. 378, n. 2, p. 216–217, jul. 2008.
DAWSON, J. M.; HEATLIE, P. L. Lowry method of protein quantification: Evidence for photosensitivity. Analytical Biochemistry, v. 140, n. 2, p. 391–393, ago. 1984.